Atividade acaricida de extratos enzimáticos a base de Metarhizium anisopliae (HYPOCREALES: CLAVICIPITACEAE) sobre Tetranychus urticae (KOCH, 1836) (ACARI: TETRANYCHIDAE)

Abstract

Os fungos entomopatogênicos se destacam como agentes de biocontrole, sendo a patogenicidade desses microrganismos relacionada à secreção de enzimas durante o processo de infecção do hospedeiro. O objetivo desse trabalho foi produzir extratos enzimáticos do fungo entomopatogênico, Metarhizium anisopliae e aplicá-lo em bioensaios com ácaro rajado (Tetranychus urticae) para avaliação acaricida. O estudo foi realizado no Laboratório de Entomologia e Acarologia e no Complexo de Laboratórios do IFES - Campus Itapina. O formulado comercial Metarril® (cepa E9) foi utilizado para obtenção de conídios de Metarhizium anisopliae. O fungo foi cultivado em 3 meios sólidos: farelo de trigo puro, farelo de trigo misturado com pó de tenébrio e farelo de trigo misturado com azeite de oliva, por 4, 8 e 14 dias (9 tratamentos). Após o tempo de incubação o substrato sólido foi diluído em água destilada, coado e centrifugado, resultando em um sobrenadante. Os sobrenadantes foram armazenados em frízer a 4°C. A atividade de protease e proteína total dos extratos foram avaliadas. Para o teste de toxicidade, a solução foi diluída em água destilada na proporção 1:1 e aplicada sobre adultos do ácaro, sendo cada tratamento composto por 7 placas de Petri, com 12 indivíduos do ácaro por placa. As unidades experimentais foram constituídas de discos de folhas de feijão de porco (4cm de diâmetro), com algodão umedecido ao redor para evitar a fuga dos ácaros. A solução foi aplicada de forma direta com o auxílio do aerógrafo modelo Alfa 2, conectado a um compressor calibrado com pressão constante de 1.3 bar, sendo 1 mL da solução em cada arena. O efeito acaricida foi avaliado 24, 48 e 72 horas após a pulverização das soluções. Os dados de mortalidade foram submetidos à análise de Tukey a 5% de significância pelo programa Sisvar (v.5.6). Os meios de cultivo contendo farelo de trigo e farelo de trigo misturado com pó de tenébrio se mostraram bons substratos para produção enzimática de Metarhizium anisoplie. O extrato enzimático de Metarhizium anisoplie cultivado em farelo de trigo puro e misturado com pó de tenébrio, com 8 dias, apresentaram alta atividade de protease e toxidade a Tetranychus urticae. Os resultados mostraram que o extrato enzimático de Metarhizium anisoplie possui potencial bioacaricida, podendo ser utilizado no manejo da praga.

The entomopathogenic fungi stand out as biocontrol agents, the pathogenicity of these microorganisms correlates to the secretion of enzymes during the infection process of the host. Therefore, the objective of this work was the elaboration of an enzymatic extract from the entomopathogenic fungus, Metarhizium anisopliae for the management of the spider mite (Tetranychus urticae). The study was conducted in the Entomology and Acarology Laboratory and in the Laboratory Complex of IFES - Itapina Campus. The commercial formulation Metarril® (strain E9) was used to obtain Metarhizium anisopliae conidia. The fungus was cultivated in 3 solid media: pure wheat bran, wheat bran mixed with insect meal, and wheat bran mixed with olive oil, for 4, 8 and 14 days (9 treatments). After the incubation time the solid substrate was diluted in distilled water, strained and centrifuged, resulting in a supernatant. The supernatants were stored in a refrigerator at 4°C. Protease activity and total protein of the extracts were evaluated. For the toxicity test, the solution was diluted in distilled water in a 1:1 ratio and applied on adults of the mite, with each treatment consisting of 7 Petri dishes, with 12 individuals of the mite per dish. The experimental units consisted of discs of pork bean leaves (4cm diameter), with moistened cotton around them to prevent the mites from escaping. The solution was applied directly using an Alfa 2 airbrush, connected to a calibrated compressor with a constant pressure of 1.3 bar, with 1 mL of the solution in each arena. The acaricidal effect was evaluated 24, 48, and 72 hours after spraying the solutions. The mortality data were submitted to Tukey's analysis at 5% significance using the Sisvar (v.5.6) program. The culture media containing wheat bran and wheat bran mixed with insect meal proved to be good substrates for Metarhizium anisoplie enzyme production. The enzymatic extract of Metarhizium anisoplie cultivated in pure wheat bran and mixed with insect meal, at 8 days, showed high protease activity and toxicity to Tetranychus urticae. The results showed that the enzymatic extract of Metarhizium anisoplie has bioacaricidal potential and can be used in pest management.