Análise da expressão gênica de D4H em cultivares de vinca–de–madagáscar (Catharanthus roseus L.)

Abstract

A expressão de um gene é determinada por mecanismos genéticos e fatores externos à planta. Pesquisas têm procurado entender esses mecanismos para gerar novos produtos para o homem. Nesse sentido, a vinca (Catharanthus roseus) destaca-se como planta de interesse farmacológico para a produção de vimblastina e alcalóides vincristínicos, com utilização em tratamentos quimioterápicos. Na via de produção desses alcalóides, a desacetilvindolina-4-hidroxilase (D4H), importante regulador, é alvo de pesquisa para superexpressão. Outro mecanismo de grande relevância é o cultivo de calos, que pode ser empregado para estudar o desenvolvimento celular e explorar produtos provenientes do metabolismo primário e secundário. Portanto, o presente trabalho objetivou selecionar o método de extração de RNA mais eficiente para análises moleculares, analisar a expressão do gene D4H em diferentes variedades de vinca e substratos, bem como induzir calos em explantes foliares de vinca em meio de cultura. Foram testados quatro protocolos, sendo eles: Trizol®; LIU et al, 2018; KUMAR; BHATIA, 2015 e KUMAR; BHATIA, 2015 com modificações, e o RNA foi quantificado em Fluorômetro QuBit 2.0. A expressão D4H foi avaliada para as diferentes variedades C. roseus e substratos por RT-qPCR usando 18S como normalizador e os dados foram analisados por 2-ΔΔCT. Para indução de calogênese foi utilizado meio MS suplementado com 0,5 mg/L de 2,4-diclorofenoxiacético em pH 6,2. Com relação aos protocolos testados, o protocolo (Trizol®) apresentou maior eficiência quanto à quantidade de RNA obtida, já em relação à expressão gênica, a variedade “Vinca cora strawberry” e o substrato composto por areia: latossolo (1:1) apresentaram maiores expressão do gene D4H, regulador da via metabólica de alcalóides em C. roseus. Além disso, foi possível indução da calogênese, porém não foi obtida quantidade de massa de calos significativa o que pode ter sido influenciado pela luminosidade e pela oxidação fenólica, sendo necessárias investigações futuras